Estudo da superexpressão da enzima B-galactosidase recombinante de kluyveromyces sp. Em diferentes Cepas de escherichia coli

Resumo

A enzima B-galactosidase hidrolisa a lactose em glicose e galactose. É utilizada para produção de alimentos com baixo teor deste açúcar. A obtenção dessa enzima recombinante poderá permitir sua produção em maiores quantidades com um menor custo. O objetivo deste trabalho foi estudar a superexpressão da enzima B-galactosidase recombinante de Kluyveromyces sp. em diferentes cepas de E. coli. O gene da B-galactosidase foi amplificado e ligado a um vetor de clonagem e subclonado em vetor de expressão. Para os testes de expressão, foram testadas diferentes cepas eletrocompetentes de E. coli: BL21 (DE3), Rosetta (DE3), Rosetta-gami 2 (DE3), C41 (DE3) e C43 (DE3); diferentes meios de cultura: LB, TB e M9; temperaturas de cultivo: 30°C e 37°C; e concentrações do indutor isopropil-tiogalactosídeo (IPTG): 0,05 mM e 1 mM. Foram realizadas coletas nos tempos 3 h, 6 h, 9 h, 24 h e 27 h após a indução. A expressão da enzima foi analisada por SDS-PAGE, quantificada pelo método de Bradford e sua atividade enzimática foi determinada usando o-nitrofenol-B-D-galactopiranoside (ONPG) como substrato. A cepa BL21 (DE3) obteve a maior atividade enzimática específica, aproximadamente 250 U/mg_proteína, em LB, à 30°C, após 9 horas de indução com 0,05 mM de IPTG.